Introducción
En
el presente blog se hablará del microscopio de campo oscuro, conociendo ya que
el microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son sumamente
pequeños y que no se pueden visualizar a simple vista. Adicionalmente este
microscopio está catalogado como un microscopio de tipo óptico. Se estará
explicando cómo utilizarlo de la manera correcta, se definirán sus parte y el
modo en el cual se pueden observar las células o muestras biológicas en el
mismo.
Historia
El microscopio
de campo oscuro fue diseñado por el físico Ricgard Zsigmond en 1903 cuando
realizaba experimentos en química de coloides. Se llama tambien ultramicroscopio
y es un microscopio cuyo sistema condensador ha sido modificado para dirigir la
luz y crear un fondo oscuro para ver muestras casi invisibles.
Microscopio de Campo Oscuro.
El microscopio de campo oscuro es
un microscopio que utiliza un gran enfoque de luz densa en
forma de un cono hueco en la muestra. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así visible la muestra contra el
fondo oscuro que tiene en su parte posterior. Se puede decir que es como las
partículas de un rayo de sol que entran en una habitación cerrada y oscura.
Como consecuencia de eso se crea un efecto en
donde las porciones transparentes del espécimen u objetos quedan oscuras,
mientras que las superficies que nos interesan de la muestra se ven brillantes
por la luz que reciben con una tonalidad entre turquesa y azul claro. Esta
forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes
e invisibles si se observan con una iluminación
normal, sin afectar a la muestra.
Figura 1. Foto del Microscopio de Campo Oscuro.
Este microscopio también es usado para la observación de muestras que
poseen alta reflexión. La luz reflejada por las partículas de polvo que llegan
hasta la retina del ojo, lo que las hace visible.
Partes del Microscopio de
Campo Oscuro.
·
Parte
Mecánica que sirve de soporte.
·
Parte
Óptica que está constituida por tres sistemas de lentes.
v Condensador especial.
v Objetivo.
v Ocular.
Figura 2.
Partes.
Los
condensadores que se emplean en el microscopio de campo oscuro son de dos
tipos: del tipo paraboloide y los del tipo cardiode.
·
Paraboloide: El cristal parabólico
está contenido por un cilindro de latón de 3,7 cm de diámetro y 2,8 cm de altura,
soldado a un anillo de 4 cm de diámetro. En su centro existe un disco de 8 mm
de diámetro que puede elevarse mediante un tornillo que atraviesa el cristal.
Esto permite conseguir un campo oscuro óptimo e idóneo.
·
Cardioide: En su parte superior se
sitúa un diafragma iris de apertura manejable mediante un pequeño vástago
dorado. Las lentes se sitúan inmediatamente debajo del diafragma incluidas en
una pieza metálica lacada en negro y desplazable lateralmente mediante una
pequeña varilla, quedando ligeramente descentradas del eje óptico del
microscopio.
Métodos para la utilización
del microscopio:
Existen
muchos métodos para observar muestras en un microscopio de campo oscuro. A
continuación se mencionaran algunas de ellas:
·
Observación
por Incidente o Reflexión: La observación por reflexión con
iluminación oblicua o anular es la más utilizada con los microscopios
estereoscopios o lupas binoculares. Por lo general no se da cuenta de que se observa
en fondo oscuro cuando el material ocupa todo el campo visual.
·
Observación
por Transmisión (Fondo Negro Central): La observación por
transmisión con una pantalla central necesita la utilización de un objetivo con
pantalla interna, con una pantalla anular, versión original y no la fabricada
industrialmente que es un contraste de fase negativa a fuerte absorción.
·
Observación
Birrefringente (Polarización): La observación de un objeto
birrefringente entre nicoles cruzados da una imagen sobre fondo negro de
naturaleza muy particular.
·
Observación
Haz Perpendicular (Fondo Negro ultramicrosopico): La
observación con un haz perpendicular a la dirección de la observación da
informaciones sobre la orientación de las partículas observadas.
Figura 3: Ejemplo de muestra en campo oscuro
El
mejor método para la utilización de este microscopio consiste en el empleo de
un condensador que mejore la resolución, que contiene un centro oscuro que
incide lateralmente sobre la muestra, para que solo los rayos que sean
difractados por las estructuras penetren en la lente objetivo, para que así la célula
parezca un objeto luminoso con un fondo oscuro.
Otra
manera de realizar este proceso para la observación de la muestra consiste en bloquear
la parte central del rayo de luz que normalmente pasaría alrededor del espécimen,
de tal manera que solo sea iluminado por rayos oblicuos. La manera más económica,
más rápida y fácil de hacerlo seria con una cartelera negra, la cual se colocaría
debajo del condensador. Este proceso funciona bien si la muestra está ampliada
x10 o x40, pero si es mayor la ampliación no es recomendable puesto que no se observaría
bien la misma para ampliaciones x100 en adelante es mejor el primer método explicado.
Su principal beneficio es que permite la observación de muestras casi invisibles y analizarlas dejándolas intactas y sin matarlas.
Figura 4. Células observadas en microscopio de campo oscuro.
Cuidados al preparar la muestra con
campo oscuro.
Se
debe tener cuidado al preparar especímenes ya que las características de los
planos de foco superior e inferior también dispersan luz y comprometen la
calidad de la imagen, como por ejemplo: el polvo, las huellas dactilares, entre
otros. En general, los especímenes delgados son mejores ya que la posibilidad
de difracción por artefactos se reduce.
Por otro lado como dato curioso casi todos los
microscopios de campo claro se pueden convertir fácilmente en un microscopio de
campo oscuro, utilizando condensadores secos o que se encuentren sumergidos en
aceite.
Como conclusión este tipo de microscopio nos permite
observar partículas dispersas en un medio totalmente homogéneo. Adicionalmente
permite la observación del movimiento Browniano de las partículas, y se puede
utilizar en preparaciones sin colorear. En él se puede visualizar los bordes de
las muestras o especímenes, lo que le da una desventaja en el sentido que no se
puede visualizar la estructura celular específica completa.
Bibliografía.
https://prezi.com/wrt2tmt7twpq/microscopio-de-campo-oscuro/
www.sld.cu/galerias/pdf/sitios/.../microscopio_de_campo_oscuro.p...
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_de_campo_oscuro
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_de_campo_oscuro
www.medic.ula.ve/histologia/anexos/.../capitulo6_1.htm
Autor: Oscar Carnevali 3er Año U
Autor: Oscar Carnevali 3er Año U
Comentarios
Publicar un comentario